CRISPR gRNA數據庫

金斯瑞提供超20,000 種含有gRNA序列的plentiCRISPRV2質粒，所有sgRNA序列已經被MIT驗證。在數據庫中，您可通過搜索基因名稱，基因標志或ID來查找相關gRNA。

為滿足您多種需求，金斯瑞不僅提供多種Cas9類型的定制質粒，也提供經由MIT驗證的空載供您選擇。

一、定制質粒類型

根據Cas9類型，定制質粒包含如下幾種：

1. 增強CRISPR/SpCas9質粒 - eSpCas9 ^New

   特異性增強SpCas9 (Enhanced specificity SpCas9, eSpCas9)，指的是?SpCas9 (K848A/K1003A/R1060A)，是經過MIT張鋒實驗室特異性改造的質粒(Slaymaker?et al.?2016).eSpCas9可以降低脫靶效率，比自然SpCas9脫靶效率降低10倍之多，同時可實現基因高效編輯。

   Cas9基因組編輯依賴于DNA雙鏈的分離。sgRNA與非靶向DNA序列的不匹配可能導致非特異性結合和分裂。為了提高基因組編輯的特異性，科學家開發了突變為K848A、K1003A和R1060A的eSpCas9。在SpCas9的非靶鏈溝槽內中和這些帶正電荷的殘基，既可以減少非靶結合，也可以刺激靶向結合，這一操作需要更嚴格的Watson-Crick堿基配對。

   服務	表達系統	篩選標記
   eSpCas9質粒	Plasmid Lentiviral	Puro GFP	獲取報價

2. SpCas9質粒 ^Hot

   Cas9內切酶是基因編輯的研究標準。當與單導RNA (single guide RNA,sgRNA)序列結合時，這些酶在基因組中產生位點特異性雙鏈斷裂(double strand breaks, DSBs)。

   • SpCas9/sgRNAs可以在all-in-one載體中表達，也可以在dual載體中單獨表達。
   • 優選的靶上SpCas9 PAM序列為NGG。
   • SpCas9還包含NGA序列的目標親和力。

   服務	表達系統	篩選標記
   SpCas9 Plasmids	Plasmid Lentiviral AAV	Amp Amp, Puro Amp, Neo Amp, GFP	獲取報價

3. SpCas9 Nickase質粒

   SpCas9 nickase (Cas9n D10A)包含一個突變，不同于SpCas9切割時形成DSB， SpCas9 nickase在切割序列時形成單鏈缺口。經過SpCas9 nickase切割后，兩個相對的gRNA序列可以有效配對，因為這種方法可以避免不必要的插入。

   服務	表達系統	篩選標記
   SpCas9 Nickase Plasmids	Plasmid Lentiviral	Amp Amp, Puro Amp, GFP	獲取報價

4. SaCas9質粒

   黃色葡萄球菌Cas9同源體(Staphylococcus aureus?Cas9 orthologue,SaCas9)是腺相關病毒(adeno-associated virus (AAV AAV)應用的理想內切酶。SaCas9比SpCas9大約短1kb，這允許了在AAV組裝時更加靈活。AAV載體較低的免疫原性，使SaCas9非常適合于體內編輯的。

   • 優選的靶SaCas9 PAM序列為NNGRRT。
   • SaCas9 對NNGRRN也有很高的親和性。

   服務	表達系統	篩選標記
   SaCas9 plasmids	AAV	Amp	獲取報價

5. 轉錄激活（Transcription Activation, SAM)質粒

   CRISPR/Cas9協同激活介質(SAM)系統已被設計用于激活下游目標的轉錄。SAM系統使用三種不同的激活因子，VP64、P65和HSF1，它們被組裝到催化失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)復合物上驅動轉錄。

   • SAM復合物由三個組分組成:一個由兩個MS2 RNA適配體組成的gRNA、一個催化失活的dCas9-VP64融合蛋白，和一個MS2-p65-hsf1激活因子融合蛋白。
   • SAM系統能夠激活編碼和非編碼的元素。
   • 查找經由MIT驗證的SAM gRNA序列，請前往gRNA數據庫。

   服務	表達系統	篩選標記
   SAM gRNA Plasmids	Plasmid Lentiviral	Amp Amp, Zeo	獲取報價
   SAM dCas9-VP64 Plasmids	Lentiviral	Amp, Blast Amp, GFP	獲取報價
   SAM MS2-P65-HSF1 Plasmids	Lentiviral	Amp, GFP Amp, Hygro	獲取報價

二、空載服務

為滿足您的科研需要，金斯瑞提供空載服務，載體序列已經由MIT驗證。這些載體包含一個17bp-1.8kb的可表達連接體，以代替定制的sgRNA序列，您可根據需要對其進行修改。