常規用于目的基因遞送的質粒，載體骨架序列一般＞1.5 kb，且通常含有抗生素抗性基因?？剐曰螂m然方便了細菌的篩選與培養，但在基因與細胞治療等領域，抗性基因殘留存在帶入體內的風險，導致耐藥性上的安全隱患。同時，載體骨架小，則具有毒性更低、免疫原性更低、表達更穩定、轉染效率高的優勢，進而提升RNA轉錄水平、蛋白表達水平。
因此，金斯瑞開發了GenCircle dsDNA，一種無抗性標記小型環狀雙鏈DNA載體合成服務，質粒骨架僅400bp+，去除抗性基因、細菌源序列、 宿主菌株外不會復制。金斯瑞可定制合成包含您目的基因的GenCircle dsDNA，提升基因與細胞治療研究的安全性與效率。
應用領域
-
細胞治療
轉座子/轉座酶載體
CRISPR基因敲入模板 -
基因治療
AAV/慢病毒包裝質粒、非病毒載體
mRNA制備模板 -
DNA疫苗研究與開發
抗原表達載體
-
細胞系/模式動物構建
基因功能研究轉座子/轉座酶載體
CRISPR基因敲入模板
服務優勢
更安全！不含抗性標記基因
不引入抗生素抗性基因/抗生素，不在非生產菌株中復制
更簡單！免疫原性/毒性更低
去除CpG島等細菌源序列，表達更穩定
更小巧！載體骨架僅400bp+，保真性好
相同質量有效序列多、細胞毒性低、轉染效率高
更高效！提升敲入效率、病毒滴度、轉錄/表達水平
敲入效率提升高達30%、病毒滴度提升高達3倍、轉錄水平提升高達4倍
服務信息
| 服務名稱 | 級別 | 目的基因長度* | 交付量* | 交付形式 | 周期 # | 應用領域 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| GenCircle dsDNA |
工業級 | 1-50 kb | 100 μg - g |
凍干粉 / 液體 （緩沖液可選） |
11天起 |
|
| 臨床前級 |
|
# 客戶可以選擇：1. 在金斯瑞合成基因后構建GenCircle dsDNA；2. 客戶自己提供已經合成好的含目的基因的質粒直接構建GenCircle dsDNA。
* 其他目的基因長度和交付量歡迎詳詢，郵件發送至oligo@genscript.com.cn或撥打電話400-025-8686轉5812或5815，專業技術支持為您服務。
# 此周期不含基因合成周期。
QC項目與標準
| QC項目 | 標準 | 高純級 | 超純級 |
|---|---|---|---|
| Sanger 測序 | 100%序列正確 | √ | √ |
| 限制性酶切分析 | 酶切后凝膠電泳分析與預期大小一致 | √ | √ |
| 分光光度計 | 交付量保證 | √ | √ |
| Nanodrop UV值測定 | A260/280 = 1.8-2.0 | √ | √ |
| 電泳檢測無可見RNA/基因組DNA殘留 | 無可見條帶 | √ | √ |
| Tanon凝膠定量 | 超螺旋程度高級別質?！?90% | √ | √ |
| TAL內毒素定半量 | < 0.01 EU/μg | √ | |
| ≤ 0.005 EU/μg | √ | ||
| 生物負載測定 | 48小時無可見細菌/真菌生長 | √ | √ |
| pH檢測 | 8.0±0.5 (TE緩沖液) | √ | |
| 殘留E. coli DNA（定量PCR） | ≤ 2% | √ | |
| 殘留宿主蛋白（HCP ELISA） | ≤ 1% | √ |
案例分享
結果：基因敲入效率效率提升高達 30% （較之常規質粒）
- CRISPR基因敲入（敲入2.5 kb 片段）
- 轉座子基因敲入（敲入4.8 kb 片段）
結果：病毒滴度提升到高達 3倍 、ITR序列更穩定、規避抗性基因（較之常規質粒）
- 慢病毒包裝
- AAV包裝
| 組別 |
病毒滴度 (IFU/ml) |
抗性基因 |
|---|---|---|
| pRRL-PGK-EGFP （常規質粒） |
1.23E+8 | 檢出 (Ct value<30) |
| pRRL-PGK-EGFP MF （GenCircle dsDNA） |
3.81E+8 | 未檢出 (Ct≥35 ) |
| 組別 |
病毒滴度 (copies/ml) |
抗性基因 |
|---|---|---|
| CMV EGFP AAV2 （常規質粒） |
1.12E+12 | 2% |
| CMV EGFP MF （GenCircle dsDNA） |
1.22E+12 | 未檢出 |
結果：轉錄水平提升高達 4倍 ，減少免疫反應（較之常規質粒）
結果：蛋白表達水平提升高達 39% （較之常規質粒）
質量分析
GenCircle dsDNA服務成功交付全球多個訂單，涵蓋不同長度的目的基因，包括多個難度項目
